哺乳动物骨髓染色体畸变试验方法与结果阳性判定

哺乳动物骨髓染色体畸变试验是一项体内遗传毒性检测方法，用于评价受试物经吸收、代谢后对啮齿类动物骨髓细胞染色体结构的损伤效应。

本文围绕试验对象与适用范围、动物分组与染毒设计、骨髓采集与制片、镜检判读、仪器条件、标准依据以及阳性结果判定等内容展开说明，为委托方在方案设计与结果解读阶段提供参考。

哺乳动物骨髓染色体畸变试验对象

该试验的检测对象是受试物在活体内诱导骨髓细胞中期染色体发生结构畸变的能力。

常见送检物包括食品添加剂、新食品原料、化妆品原料、农药原药与制剂、日用化学品、消毒产品以及药物候选物。

试验系统首选健康性成熟的啮齿类动物，小鼠和大鼠使用最多，骨髓因细胞更新快、分裂相丰富而成为取材组织。

检测终点覆盖染色单体型畸变与染色体型畸变两大类。

前者包括单体断裂与单体交换，后者包括断片、缺失、环状染色体、双着丝粒体与易位等。

在安全性毒理学评价程序中，本试验通常与细菌回复突变试验、微核试验组成评价组合，用于判断受试物有无致突变风险。

试验动物分组与染毒设计

动物经检疫适应后进入试验，一般选用小鼠或大鼠，雌雄各半，每组可分析动物数量需满足统计学要求。

试验设阴性对照组、阳性对照组以及至少三个受试物剂量组，阳性对照常选用环磷酰胺等已知断裂剂。

高剂量原则上取最大耐受剂量或限度剂量，限度剂量为2000 mg/kg体重/日，同时应避免动物出现严重毒性或死亡。

染毒途径首选经口灌胃，也可依据实际暴露方式选择腹腔注射或经皮途径。

染毒方案分单次染毒与连续多次染毒两类，末次染毒后的采样时间约为1.5个细胞周期，并常增设间隔约24小时的第二采样点。

剂量组数量、采样点多少与动物品系决定了试验规模，也是送检方核算费用的主要变量。

骨髓采集与染色体制片流程

采样前数小时，动物需腹腔注射秋水仙素或秋水仙酰胺，使骨髓细胞阻滞于分裂中期。

随后按既定时间点安乐处死动物，进入制片环节。

制片操作在洁净条件下连续完成，主要步骤如下：

剥离股骨并剪去两端，用生理盐水冲出骨髓腔内细胞； 离心收集细胞，以0.075 mol/L氯化钾溶液进行低渗处理； 以甲醇与冰醋酸按3:1配制的固定液反复固定； 将细胞悬液滴于预冷洁净载玻片上，自然干燥； 吉姆萨染液染色，晾干后封片备检。

低渗与固定效果直接决定染色体的分散度与形态清晰度。

制片不良会造成分裂相丢失或重叠，这类玻片应在镜检前剔除并重新制片。

镜检分析与畸变类型判读

阅片在油镜下进行，玻片经盲法编号后由分析人员独立读片，必要时安排双人复核。

每只动物通常分析不少于100个分散良好的中期分裂相。

分析时先核对二倍体数目是否正常，小鼠为2n=40，大鼠为2n=42，再逐相记录畸变类型。

判读环节中，裂隙单独统计，不计入畸变率；多倍体与内复制细胞另行记录。

除结构畸变外，每只动物还需计数约1000个细胞中的分裂相比例，即分裂指数，用于评估受试物对骨髓细胞的毒性抑制程度。

畸变细胞数与畸变类型分别汇总，构成统计与判定的原始数据。

仪器设备与环境条件

试验涉及的设备均为通用类型，包括生物显微镜与油镜镜头、显微成像及染色体分析系统、低速离心机、恒温水浴设备、分析天平以及动物解剖器械。

动物饲养区域需具备屏障设施，维持规定的温度、湿度与洁净度，保证试验期间动物状态稳定。

试剂方面，秋水仙素类阻滞剂、低渗盐溶液、固定液与吉姆萨染液需按规范配制，并在规定期限内使用。

玻片、载玻片清洗与染色条件的一致性，直接影响不同批次数据之间的可比性。

试验标准与技术规范

我国食品领域执行GB 15193.6—2015《食品安全国家标准 哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验》，对动物、剂量、采样与判定的技术要求作出了规定。

国际层面对应OECD化学品测试指南OECD TG 475，其2016年修订版更新了剂量上限与数据判定条款。

化妆品原料评价可参照《化妆品安全技术规范》（2015年版）中收载的体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验方法，农药登记则依据我国农药登记毒理学试验方法相关标准开展。

用于药品注册或涉及申报的检测时，试验一般应在符合药物非临床研究质量管理规范的条件下实施。

原始记录、玻片留存与数据归档需满足可追溯要求，以备评审与核查。

结果评判与阳性判定标准

一批数据可予采纳的前提包括两点：阴性对照组的畸变率落在实验室历史背景数据范围内；阳性对照组畸变率明显升高，能证明试验系统敏感。

任一前提不成立，本批数据即判为无效，需查明原因后重做。

阳性结果的判定依据包括两类情形。

其一，某一剂量组的畸变细胞率经统计学检验高于阴性对照，并超出历史背景数据范围。

其二，畸变率随剂量增加而升高，呈现剂量—反应趋势。

常用统计方法包括卡方检验、Fisher精确检验与趋势检验，统计学结论需与生物学意义结合判断。

当剂量相关性不明确，或仅个别剂量组出现边缘升高时，结果判为可疑，应调整剂量间距或采样时间后重复试验。

报告一般载明动物信息、染毒方案、各组畸变细胞数与畸变类型构成、分裂指数以及统计结论，供评价方审阅。

与体外染色体畸变试验区别

OECD TG 473对应的体外哺乳动物细胞染色体畸变试验，以离体培养细胞为材料，需分别设置加与不加代谢活化系统的处理条件，可在短期内完成大批量样品的初筛。

体内骨髓试验则覆盖吸收、分布、代谢与排泄的完整过程，更能反映受试物在整体状态下的遗传毒性表现。

两类试验观察终点相近而定位不同。

常规评价策略是先以体外试验初筛，阳性或存疑物质再进入体内试验确认。

与同属体内试验的微核试验相比，骨髓染色体畸变试验直接观察中期相的结构异常，信息维度更细；微核试验以微核率为终点，两者在组合评价中互为补充。

常见问题与解答

哺乳动物骨髓染色体畸变试验的检测费用主要受哪些因素影响？

费用与试验规模直接相关。

动物品系与数量、剂量组数目、采样点多少、对照品设置以及每只动物需分析的分裂相数量，共同决定饲养、染毒、制片与阅片的工作量，不同项目的报价因此存在差异。

哺乳动物骨髓染色体畸变试验结果存疑时如何复检？

剂量相关性不明确或仅个别剂量组边缘升高时，结果判为可疑，应调整剂量间距或采样时间后重复试验；对照数据不成立时本批结果无效，需查明原因重做。

对数据有异议，可调阅盲法阅片原始记录并安排双人复核。

哺乳动物骨髓染色体畸变试验的周期与报告交付包含哪些环节？

试验周期由动物检疫适应、染毒、两个采样点的间隔、制片、镜检分析与统计汇总等环节构成，具体时长以检测机构方案为准。

报告内容一般包括动物信息、染毒方案、各组畸变细胞数与畸变类型构成、分裂指数及统计结论。

乳制品中安乃近胶体金快速检测卡/试剂盒

在乳制品质量安全监管中，兽药残留问题一直是消费者关注的焦点。

安乃近作为一种价格低廉、起效快的解热镇痛类药物，在畜牧业中曾被广泛用于畜禽的退热和镇痛治疗，若用药不规范或未遵守休药期规定，便可能导致其残留进入生鲜乳及乳制品中。

长期摄入含有安乃近残留的乳制品，可能对人体造血系统等造成潜在危害。

因此，对乳制品中安乃近残留进行快速、高效的筛查，成为保障乳品安全的重要环节。

深圳市艾瑞斯仪器有限公司生产的安乃近胶体金快速检测卡正是顺应这一需求而生的一种便捷、可靠的现场检测工具。

什么是安乃近胶体金快速检测卡？ 艾瑞斯仪器公司的安乃近胶体金快速检测卡是基于胶体金免疫层析技术开发的定性检测产品。

它利用胶体金作为示踪标志物，通过高度特异性的抗原抗体反应，对乳制品样品中是否含有安乃近残留进行快速判断。

其核心优势在于“快、简、廉”——整个检测过程仅需3至10分钟，无需大型仪器设备，操作门槛低，非常适合基层监管、奶站收购、乳品加工企业原料验收及牧场自检等场景。

将处理后的乳制品样品溶液滴加到检测卡的加样孔后，液体会在膜的毛细管作用下向前流动。

流动过程中，若样品中含有安乃近，它会先与检测卡上的特异性抗体结合，随后在检测线（T线）区域与预先包被的抗原竞争结合位点。

最终通过T线和质控线（C线）的显色情况，即可判定样品中是否含有安乃近残留： 阴性（-）：T线与C线均显色，表明样品中安乃近含量低于检测阈值。

阳性（+）：仅C线显色，T线不显色，表明样品中安乃近含量达到或超过检测阈值，判定为疑似阳性。

无效：C线未显色，说明操作不当或试纸条失效，需重新检测。

如何正确使用？关键步骤与注意事项 平衡室温：检测前将未开封的检测卡和样品恢复至室温（20–30℃）。

取样：液态奶样可直接吸取；若样品较黏稠，可用纯化水进行适当稀释后待测。

加样：取出检测卡水平放置，使用一次性滴管吸取处理后的样品液，缓慢滴加3滴（约100μL）至加样孔（S孔）中。

计时判读：加样后开始计时，在5分钟内读取结果，超过10分钟后判读结果视为无效。

在使用过程中，以下几点需特别注意： 检测卡开封后应立即使用，避免受潮、暴晒或处于高温高湿环境中。

一次性滴管必须专样专用，严禁交叉使用，以免造成样品污染。

严格控制加样量和判读时间，过量加样或超时判读均可能导致结果偏差。

该产品为定性初筛工具，不得用于定量分析。

阳性结果建议采用实验室方法（如液相色谱-质谱联用）进行确证。

积医“潭”健康丨体检发现前列腺特异性抗原升高，到底要不要做穿刺？

前列腺癌是男性泌尿生殖系统常见恶性肿瘤，早期大多没有尿频、排尿不适等典型症状，很多患者都是体检做前列腺特异抗原（PSA）筛查时才发现指标异常。

拿到报告单，不少男性会感到疑虑“指标高是不是就得了癌？”“医生建议的前列腺穿刺，听着就让人害怕，到底要不要做？” 临床工作中，医生经常遇到对PSA筛查和穿刺存在误解的患者。

下面两个真实病例，就很有代表性。

44岁的范先生体检发现PSA升高，到我院泌尿外科门诊复查。

多次复查结果相近，进一步进行前列腺MRI检查，结果提示前列腺多发异常信号。

医生建议完善前列腺穿刺活检，明确是否存在前列腺癌，以此制定后续治疗方案。

范先生心存疑惑：“我这么年轻，怎么会得前列腺癌？” 医生耐心解释，目前多项检查指标提示异常，应当引起重视，倘若确诊前列腺癌，早发现、早干预预后更佳。

最终患者采纳建议，入院接受前列腺穿刺活检，病理结果证实为前列腺癌。

患者白先生，今年70岁，体检查出PSA8.0ng/ml，到我院复查时T-PSA降至2.87ng/ml。

但前列腺MRI提示前列腺多发结节，且白先生的父亲有前列腺癌病史。

起初患者并未重视，认为PSA已经恢复正常，不可能是前列腺癌，拒绝穿刺检查。

医生结合患者年龄、肿瘤家族史及影像学结果综合评估，仍不能排除前列腺癌可能，建议进行前列腺穿刺活检。

经过慎重考虑，白先生同意穿刺，最终病理确诊前列腺癌。

两位患者的经历，也是很多男性拿到PSA异常报告后的真实写照。

做前列腺穿刺活检疼不疼？有风险吗？是不是一定要做？今天我们就把相关知识讲清楚。

PSA是什么 PSA全称前列腺特异性抗原，是前列腺细胞分泌的一种蛋白。

PSA检测是目前筛查前列腺癌最基础、最常用的手段。

临床一般将PSA＜4ng/ml作为参考正常值。

但有一点需要明确， PSA4ng/ml不等于患上前列腺癌，前列腺炎、前列腺增生，甚至憋尿、射精后都可能引起指标一过性升高。

PSA更像一个“警报器”，提示前列腺可能存在异常，具体病因还需要进一步检查确认。

PSA升高后，通常还要做哪些检查 首先是 直肠指检。

如果存在前列腺癌，直肠触诊可摸到质地坚硬的前列腺组织，部分患者能触及质硬结节。

其次是 多参数前列腺磁共振（mpMRI），这是非常关键的影像学检查，能够清晰显示前列腺内部结构，一旦发现可疑病灶，前列腺癌风险会明显升高。

最后就是 前列腺穿刺活检，也是确诊前列腺癌的“金标准”。

在超声引导下，医生经直肠或会阴对前列腺取样，获取少量前列腺组织送病理检测，判断组织内是否存在癌细胞。

哪些情况需要做前列腺穿刺活检 依据《中国泌尿外科和男科疾病诊断治疗指南（2022 版）》，满足以下任一情况，建议前列腺穿刺活检： 直肠指检发现前列腺可疑结节，无论PSA数值高低； 超声或MRI检出前列腺可疑病灶，无论PSA数值高低； PSA10ng/ml，不论f/tPSA与PSA密度； PSA在410ng/ml区间，同时f/tPSA或PSA密度存在异常。

除此之外，医生还会结合年龄、肿瘤家族史综合判断。

年龄50岁以上男性，或是45岁以上且有前列腺癌家族史的男性，属于高危人群，评估会更为谨慎。

穿刺结果良性，还需要复查吗 很多人关心这个问题。

首次穿刺病理良性，并不代表可以完全放松警惕。

穿刺取样存在局限性，肿瘤病灶有可能落在取样范围之外。

对于高度怀疑前列腺癌、但穿刺结果阴性的患者，医生一般建议首次穿刺后6～12个月复查，必要时二次穿刺。

也无需频繁穿刺。

常规每6～12个月复查PSA与直肠指检，按需复查前列腺MRI。

若PSA稳定，两次穿刺均为阴性，复查MRI未见可疑结节，则患前列腺癌概率很低；若无显著异常，一般不重复穿刺。

前列腺穿刺会很痛吗 前列腺穿刺属于微创操作，整个过程通常十几分钟即可完成。

穿刺前会进行充分麻醉，疼痛感较轻。

我院开展腰麻或静脉全麻下前列腺穿刺活检，患者全程无痛，无需惧怕疼痛问题。

供稿丨泌尿外科 徐啸 来源：北京号 作者: 北京积水潭医院