如何高效制备生物素标记RNA探针？

探针合成的“痛难点”：产量低、标记弱

关于探针合成，我们先来说说产量，体外转录是制备RNA探针的常用手段，但传统的转录体系往往效率有限。

除此之外呢，更让人头疼的是标记效率。

生物素标记探针就是在转录过程中把生物素标记的UTP掺入RNA链中，原理并不复杂。

但问题在于，市面上不同品牌提供的生物素化核苷酸质量参差不齐。

常常导致的结果就是，耗时大半个月做的实验，最后只能对着结果叹气。

探针合成的的两大标准：高产量+高掺入率

根据我们实验室的经验来看，目前市面上常采用的探针合成试剂盒，主要有Starvio和赛默飞两大品牌。

而针对上述这些“痛难点”，先来说说Starvio生物素标记RNA探针合成试剂盒给出的解决方案。

首先，试剂盒配备了基因工程改造的高活性T7 RNA聚合酶，它经过了反复优化，RNA探针合成效率更胜一筹。

较强的DNA模板亲和性，使单次反应即可制备6-10 μg的高活性RNA探针。

再来看赛默飞这边，单次反应的RNA探针制备量在2-6ug。

数据一目了然，产量说明一切！

其次，Starvio采用的是Biotin-16-UTP，而不是常见的Biotin-11-UTP。

两者只差一个数字，效果却有着很大的区别。

Biotin-16-UTP的连接臂更长，能够有效降低生物素在掺入过程中的空间位阻，让RNA聚合酶能够更高效地把生物素“拖”进延伸中的RNA链里，从而能够更加高效地掺入合成的RNA探针。

配合经过反复优化的反应缓冲体系，可以实现最大化的生物素标记，使合成的 RNA 探针具备超高的检测灵敏度。

换句话说，每一条探针上都能“挂”上更多的生物素分子，后续结合显色时信号也会更强。

实验数据就是底气！

口说无凭，让实验数据来说话。

我们实验室采用了Starvio合成的Biotin-GAPDH RNA探针，对5倍梯度稀释的GAPDH PCR产物进行了斑点杂交检测。

从20 ng到4 ng、0.8 ng，直到稀释到0.16 ng，每个点都能看到清晰可辨的特异性信号，并且背景干净（如下图1所示）。

这意味着，即使在靶标极低的情况下，Starvio探针依然能够稳定地给出可靠信号。

选对“帮手”，让实验事半功倍！

如果你曾也遇到过探针产量不够、条带信号微弱、背景高到让人头疼的情况，不妨试试Starvio这款生物素标记RNA探针合成试剂盒，让高产量和高掺入率为你的实验助力！